واکنش زنجیره ای پلی مراز یا PCR
تاریخچه
نظریه اولیه برای تشکیل PCR های دیجیتالی به سال ۱۹۹۲ برمی گردد اما به طور کلی درسال ۱۹۵۵ گسترش یافت . این روش ، یک روش گسترش وآشکار سازی نمونه های اسیدنوکلئیکی است و از همان روند PCR معمولی پیروی می کند امااین روش مبتنی بر رقیق سازی نمونه های DNA در بخش ها یی جداگانه است به طوری که هیچ واکنشی بین بخش های جدا از هم صورت نمی گیرد. سومین نسل PCR ها محسوب می شود (نسل اول PCR معمولی ونسل دوم Real Time PCR ) ، که برای کمیت سنجی مطلق نمونه های اسیدنوکلئیکی به کار می رود.
این نوع PCR به روش های مختلفی قابل انجام است ولی اساس جداسازی بخش های مختلف است.
مزایای PCR قطره ای دیجیتالی در مقایسه با Real time PCR
- عدم استفاده از استاندارد های خارجی : در Real Time PCR ما مجبوریم برای رسم منحنی استاندارد از استاندارد های خارجی استفاده کنیم ، از طرفی تهیه تست های Absolute دشوار می باشد واین تست ها هزینه بر هستند. اما با این روش ما به رسم منحنی استاندارد نیازی نداریم.
- در Real Time PCR ، نقطه ای که فلورسانس واکنش ، منحنی استاندارد را قطع می کند CT نامیده می شود که به شدت تحت تاثیر عواملی چون کارایی PCR ، تجهیزات و… می باشد.
- دقت بالا را برای تکرار پذیری بیشتر در مقادیر کم نمونه ایجاد می کند ، وسطح دقت مورد نظر دست یافتنی وقابل تنظیم است.
- حساسیت بیشتری برای آشکار سازی موتاسیون های نادر فراهم می کند.
- به مهار کننده ها تولرانس بالایی دارد. مهارکننده های خیلی کوچک هنگام رسم منحنی استاندارد روی مقادیر تاثیر می گذارند که خود منجر با یک تغییر بزرگ در نتایج کار می شود چون از استاندارد خارجی استفاده نمی شود پس خیلی متاثر از آن ها نیست.
- یک پاسخ خطی رابرای تعداد کپی های موجود در نمونه فراهم می کند که منجر می شود تغییرات بسیار کوچک خودش را نشان دهد.
- به تعداد سیکل ها برای تعیین مقادیر اولیه مبتنی نیست که این خود نیاز مارا به اطلاعات غیر صحیح فاز های لگاریتمی از بین می برد.
- توانایی آنالیز مخلوط های پیچیده را دارد ( نمونه ما را از بین نمونه های دیگر تشخیص دهد ) .