چرخه زندگي يک رتروويروس
اصلاح ژنتيکی رتروويروسها جهت توليد حاملهايی برای استفاده در ژندرمانی
يک ويژگي مهم همانندسازي و بستهبندي رتروويروسها اين است که پروتئينهايي که توسط ژنهاي gag، pol و env براي رتروويروسها رمزگذاري ميشوند را ميتوان در ترانس تهيه نمود. به عبارت ديگر وجود این ژنها بر روي ژنوم ويروس براي اينکه مراحل همانندسازي و بسته بندي RNA رخ دهد، ضروري نيست. در عوض، خطوط سلولي با نام خطوط سلولي بستهبندي کننده ميتوانند توليد شوند که ادغام اين ژنها در کروموزومهايشان و عملکردشان را در برابر رتروويروسهاي ورودي ناقص حفظ مينمايند. در هر شکل، توانايي بستهبندي کردن يک ژنوم رتروويروسي RNA به درون يک پوشش ويروسي جهت توليد ذره ويروسي نيازمند حضور فيزيکي توالي ساي بر روي اين مولکول RNA است. از اين رو براي توليد يک حامل رتروويروسي، ژنهاي gag، pol و env ميتوانند از RNA ويروسي حذف شوند بدون اينکه بر بستهبندي RNA به درون ويريونهاي جديد اثر بگذراند به اين شرط که LTRهاي ويروسي، توالي بسته بندي کننده و چند توالي ديگر که وجودشان در رونويسي معکوس حائز اهميت است، دست نخورده باقي بمانند. فعالیت ترانس اکتین در پروتئینهای Gag، Pol و Env توسط خط سلولي بستهبندي کننده، ایجاد میشود.
جهت آمادهسازي حامل رتروويروسي براي پروتکلهاي ژندرماني(شکل ۵-۱۴)يک نسخه از DNAي ژنوم RNA ويروسي را نخست به وسيله حذف توالي ژنهاي gag، pol و env، در محيط کشت از لحاظ ژنتيکي تغيير ميدهند. تواليهاي DNA توسط ژني که قرار است به درون سلولهاي ميزبان انتقال يابد، به همراه ژن ديگري که به عنوان ژن مارکر انتخابي عمل کرده و رديابي سلولهاي حامل DNA ويروسي اصلاح شده را ميسر ميسازد، جايگزين ميشوند. مهم است که جهت داشتن بيان مناسب ژن، هنگام توليد حامل، ژنهايي که به تازگي وارد شدهاند تحت کنترل يک جايگاه پروموتور قرار بگيرند. عملکرد پروموتور ميتواند توسط تواليهاي ويروسي LTR انجام شود يا به جاي آن، تواليهاي پروموتور ديگر ميتوانند به حامل تغيير داده شده به طريق ژنتيکي اضافه گردند.
جهت بالا بردن ايمني، اصلاحات بيشتري بر روي ژنوم ويروسي انجام ميشود تا احتمال اينکه رويدادهاي نوترکيبي درون سلول رخ دهند و ويروسي توليد شود که عفونتزايا داشته باشد، از بين برود. اين اصلاحات شامل انجام دادن حذفهای مختلف و بازآرايي تواليهاي درون حامل DNA و همينطور DNA موجود در خط سلولي بستهبندي کننده که پروتئينهاي عمل کننده در ترانس را تهيه ميکند.
برگرفته از کتاب پزشکی هافی
